基于iTRAQ技术探讨水蛭干预IgA肾病大鼠模型蛋白质组学研究

目的运用iTRAQ结合质谱技术检测IgA肾病(IgAN)大鼠模型尿液蛋白指纹图谱,筛选差异表达蛋白,研究水蛭治疗血瘀证IgAN的作用机制。方法选用6周龄的Wistar雄性大鼠140只,运用脂多糖牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳方法建立实验性IgAN模型,造模成功后,随机分为模型对照组(不给予干预)、生理盐水对照组(给予生理盐水2 mL/100 g灌胃)、水蛭高剂量治疗组(给予泼泥松5.5 mg·kg^-1·d^-1+水蛭1.2 g·kg^-1·d^-1灌胃。每日一次)、水蛭中剂量治疗组(给予泼泥松5.5 mg·kg^-1·d^-1+水蛭0.6 g·kg^-1·d^-1灌胃。每日一次)、水蛭低剂量治疗组(给予泼泥松5.5 mg·kg^-1·d^-1+水蛭0.3 g·kg^-1·d^-1灌胃。每日一次)、泼尼松治疗对照组(给予泼尼松5.5 mg·kg^-1·d^-1),另设立空白对照组,每组20只。收集各组大鼠尿液样本,经过SDS-PAGE电泳后,进行iTRAQ标记,采用离线二维液相色谱分离与点靶以及质谱分析,运用数据库检索对各组样本进行相对定量分析,并利用生物信息学软件进行信息学分析。结果以P值<0.05且蛋白丰度差异<0.83或蛋白丰度差异>1.2为差异蛋白筛选标准,共筛选出的16个差异蛋白,其中模型对照组和空白对照组相比上调、水蛭治疗后下调的蛋白有6个,模型对照组和空白对照组相比下调、水蛭治疗后上调的蛋白有10个。采用KEGG富集分析筛选出和IgAN发生、发展密切相关的有10条分子信号通路,主要通路为补体和凝血级联途径。结论应用iTRAQ技术筛选出水蛭治疗后IgAN大鼠模型尿液标本中差异表达蛋白及与IgAN发生、发展密切相关的信号通路,为深入研究IgAN血瘀证的发生机制及水蛭治疗IgAN的作用机制奠定了基础。

Proteomic study of the rat model on intervention of leeches against IgA nephropathy based on iTRAQ technology

XIE Yong-xiang;SHI Wei;LONG Chun-li;LAN Fang;XIE Li-ping(Department of Nephrology,The First Affiliated Hospital of Guangxi University of traditional Chinese medicine,Nanning,530023,China)