| 摘 要： | 目的探讨使用慢病毒(LV-P2rx4)沉默P2X4嘌呤受体(P2X4R)对活化状态小胶质细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法常规建立脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)双信号诱导的小胶质细胞活化模型,随机分为(1)空白对照组(常规DMEM培养液培养);(2)活化模型组(细胞种板后待密度接近80%后先给予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(3)目的基因阴性对照组(种板1 d,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加入常规培养液,间隔12 h更换培养液);(4)目的基因阴性对照+活化模型组(种板1 d后,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加常规培养液,期间每隔12 h更换培养液,待细胞密度达80%后,予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(5)空载病毒阴性对照组(处理方法同目的基因阴性对照组);(6)空载病毒阴性对照+活化模型组(处理方法同目的基因阴性对照+活化模型组)。各组均n=6。细胞处理后每组取3孔分别提取核糖核酸(RNA)和蛋白,应用Real time PCR和Western blot法分别检测NLRP3、TNF-α的mRNA及蛋白的相对表达。结果与活化模型组和空载病毒阴性对照+活化模型组比较,目的基因阴性对照+活化模型组TNF-αmRNA相对表达水平明显减少(P <0. 001,F=195. 4),TNF-α蛋白相对表达水平显著降低(P <0. 001,F=60. 10)。结论沉默小胶质细胞中的P2X4R基因,可下调细胞中TNF-α表达,继而可能削弱小胶质细胞的炎症反应。
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