| Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 漆正宇,崔光辉,郭新,秦洁,张艳敏,桂耀庭,蔡志明.Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立[J].中国男科学杂志,2011,25(6). |
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| 作者姓名： | 漆正宇 崔光辉 郭新 秦洁 张艳敏 桂耀庭 蔡志明 |
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| 作者单位： | 北京大学深圳医院广东省男性生殖与遗传重点实验室,深圳,518036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，高等教育博士点基金，广东省自然科学基金，广东省医学科研基金 |
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| 摘 要： | 目的:建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达(P(stra8)-EGFP)的逆转录病毒包装细胞株,以方便地将P(stra8)-EGFP转导到目的细胞,为生殖细胞鉴定分选提供基础.方法:PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段,构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒.将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞,G418抗性筛选后,梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株.以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度,确定高滴度病毒包装细胞株.通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)验证该细胞株的P(stra8)-EGFP转导效果.结果:所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1.3×10(6) cfu/ml.MSC经包装细胞培养上清液感染后,在(retinoic acid,RA)诱导下能表达EGFP蛋白.结论:成功构建了将P(stra8)-EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株.
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| 关 键 词： | Stra8基因启动子 视黄酸 间充质干细胞 生殖细胞 |
Establishment of retroviral packaging cells harboring Stra8 gene promoter |
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| Qi Zhengyu,Cui Guanghui,Guo Xin,Qin Jie,Zhang Yanmin,Gui Yaoting,Cai Zhiming.Establishment of retroviral packaging cells harboring Stra8 gene promoter[J].Chinese Journal of Andrology,2011,25(6). |
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| Authors: | Qi Zhengyu Cui Guanghui Guo Xin Qin Jie Zhang Yanmin Gui Yaoting Cai Zhiming |
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