| 肿瘤相关抗原胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3多克隆抗体的制备和鉴定 |
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| 引用本文： | 赵伟,徐清问,杨颖,童晶晶,张君,李燕,邵壮,李鲁.肿瘤相关抗原胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3多克隆抗体的制备和鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2015(4):544-548. |
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| 作者姓名： | 赵伟 徐清问 杨颖 童晶晶 张君 李燕 邵壮 李鲁 |
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| 作者单位： | 中日友好医院检验科;梅奥医学中心生物化学与分子生物学系;北京大学医学部基础医学院免疫学系T细胞实验室;解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心;解放军第306医院心胸外科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金(81301495);中日友好医院青年英才计划(2014-QNYC-B-12);国家科技支撑计划课题(2012BAH24F05) |
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| 摘 要： | 目的构建胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化IGF2BP3-His融合蛋白,制备和鉴定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗体。方法用PCR方法扩增IGF2BP3基因,构建到pET-28a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导IGF2BP3蛋白的表达。所获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用透析方法脱去尿素使蛋白复性,获得IGF2BP3原核表达蛋白。将制备的原核表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,再用ELISA、Western blot法、免疫组织化学法对抗体的反应性及特异性进行鉴定。结果成功克隆出IGF2BP3基因,经测序与GenBank公布的序列一致;PCR酶切鉴定证实成功构建了pET-28a-IGF2BP3原核表达载体;质粒在BL21(DE3)中成功表达出相对分子质量(Mr)为70000左右的融合蛋白,纯化后经SDS-PAGE分析纯度在90%以上。ELISA确定抗体效价在1∶50000以上,且Western blot法和免疫组织化学技术均证实多克隆抗体能特异性识别目的蛋白。结论成功制备了特异性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3 原核表达 多克隆抗体 肿瘤相关抗原 |
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