构建组织工程气管上皮细胞和成纤维细胞联合培养的模式:与常规培养的比较

目的:构建体外组织工程化气管种子细胞的共培养模式,并与常规培养相比较,为细胞复合材料构建组织工程化气管奠定研究基础.方法:实验于2006-0512007-05在解放军第四军医大学唐都医院呼吸科实验室完成.①实验材料:1个月龄雄性健康新西兰兔3只,体质量(250.00±0.75)g.②实验过程:联合培养模式:分离气管上皮细胞和成纤维细胞,联合培养7～10 d后,根据两种细胞对胰酶浓度耐受性不同的特性,A孔中加入0.5 g/L胰酶消化,用体积分数为0.05的胎牛血清的培养液DMEM重悬细胞后移入培养板B孔中(成纤维细胞):A孔中再次加入2.5 g/L胰酶继续消化后,用K-FSM培养液重悬细胞后移入培养板C孔中(气管上皮细胞).常规培养法:分别进行气管上皮细胞分离培养和成纤维细胞分离纯化.③实验评估:观察细胞生长曲线与四甲基偶氮唑盐检测细胞的生长状态,并与常规培养的细胞进行比较.结果:①细胞生长状态:联合培养的两种细胞生长状态良好,A孔加入胰酶消化后,细胞间隙增大;B孔细胞呈现长梭形,未见铺路石状细胞;C孔出现片状生长的铺路石状细胞,未见长梭形细胞.②细胞生长曲线:分离后的细胞与常规方法培养的细胞生长曲线一致.③细胞增殖情况:四甲基偶氮唑盐检测联合培养组细胞增殖与常规方法培养差异无显著性(P＜0.05).结论:联合培养模式较常规方法更加简便易行,可以作为一种较好的气管组织工程种子细胞体外培养模式得到应用.

CO-culture mode of tissue-engineered tracheal epithelial cells and fibroblasts: Comparison with routine culture