| 重组人α1-微球蛋白在毕赤酵母中的高效分泌性表达 |
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| 引用本文： | 谈春荣,徐国宾,夏铁安. 重组人α1-微球蛋白在毕赤酵母中的高效分泌性表达[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(8): 736-739 |
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| 作者姓名： | 谈春荣 徐国宾 夏铁安 |
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| 作者单位： | 1. 100038,北京世纪坛医院检验科
2. 100034,北京大学第一医院检验科 |
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| 摘 要： | 目的 获得可溶、稳定、高纯度的α1-微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG),为临床检测标准品、质控品制备奠定基础.方法 制备构建重组人毕赤酵母真核分泌表达质粒,并对重组α1-MG进行诱导表达、纯化和鉴定.应用PCR方法扩增重组人α1-MG pET-15b质粒,得到N端带有6个组氨酸"标签"(6 × His-tag)的α1-MG融合基因,将该基因插入到真核酵母分泌表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组分泌表达质粒pPIC9-MG、并转化毕赤酵母菌菌株GS115(Pichia pastoris GS115);用甲醇进行重组人α1-MG的诱导表达,摇瓶发酵,上清α1-MG含量测定;目的蛋白采用硫酸铵沉淀、一步亲和层析纯化并通过免疫学含量测定、PAGE电泳、Western blot以及生物质谱进行鉴定;初步进行稳定性观察.结果 成功构建了重组人α1-MG真核酵母表达载体,核酸测序与预测一致,并在毕赤酵母中实现了重组人α1-MG的分泌性表达,表达量可达73 mg/L,约占总蛋白的30%.经纯化及鉴定,得到了可溶性的、具有天然蛋白生物学活性的PAGE纯目的蛋白.结论 首次在毕赤酵母中实现重组人α1-MG的高效分泌性表达,表达目的蛋白具有良好的生物学活性、稳定性好、易纯化等优点.
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| 关 键 词： | α1-微球蛋白 毕赤酵母 基因表达 |
| 收稿时间： | 2005-10-24 |
| 修稿时间： | 2005-10-24 |
Secreted expression and purification of recombinant human o1-microglobulin in Pichia pastoris |
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| TAN Chun-rong,XU Guo-bin,XIA Tie-an. Secreted expression and purification of recombinant human o1-microglobulin in Pichia pastoris[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2006, 29(8): 736-739 |
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| Authors: | TAN Chun-rong XU Guo-bin XIA Tie-an |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | alphal -microglobulin Pichia Gene expression |
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