| ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 王法财,王海萍,李琪,方圣云,沈玉先.ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备[J].安徽医科大学学报,2009,44(6). |
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| 作者姓名： | 王法财 王海萍 李琪 方圣云 沈玉先 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室,省部共建,合肥,230032;安徽医科大学临床药理研究所,合肥,230032;安徽医科大学教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室,省部共建,合肥,230032;安徽医科大学基础医学院神经生物学教研室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的 制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法 将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法 判断融合蛋白的表达量及纯度.将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株.体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb.用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定.结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间.且均有较好的特异性.结论 已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 抗体 单克隆/分离和提纯 |
Prokaryotic expression of human ARMET and preparation of monoclonal antibodies against recombinant hARMET |
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