人融合蛋白基因GST-hPBD的构建、表达与纯化

为构建和纯化融合蛋白基因GST-hPBD，采用RT-PCR方法克隆与活化Racl相结合的hPBD基因片段，构建pGEX-2T／hPBD原核表达载体，于大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-hPBD融合蛋白。结果表明，经基因测序证实融合蛋白原核表达载体pGEX-2T／hPBD构建正确，在大肠杆菌中GST-hPBD融合蛋白表达纯度大于70％，其分子量为36 kD；Pull down分析检测到血管内皮ECV304细胞表达活化Racl蛋白。本研究结果为检测血管内皮细胞活化Racl表达奠定了实验基础。