| 人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备 |
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| 引用本文： | 陈婷梅,俸家富,曹炬,文阳安,涂植光.人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备[J].第三军医大学学报,2007,29(10):938-940. |
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| 作者姓名： | 陈婷梅 俸家富 曹炬 文阳安 涂植光 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的 构建人胱抑素C(cystatin C, Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备Cys C抗血清. 方法 从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32 (a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA、Western blot进行检测.结果 测序证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符;SDS-PAGE、Western blot结果证实获得相对分子质量为35×103的Cys C 融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2 亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶8 000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合. 结论 获得了Cys C重组蛋白及特异性多克隆抗体.
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| 关 键 词： | 胱抑素C 原核表达系统 蛋白纯化 抗血清 |
| 文章编号： | 1000-5404（2007）10-0938-03 |
| 修稿时间： | 2006-06-28 |
Prokaryotic expression, purification, identification of human cystatin C and preparation of its antiserum |
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| CHEN Ting-mei,FENG Jia-fu,CAO Ju,WEN Yang-an,TU Zhi-guang.Prokaryotic expression, purification, identification of human cystatin C and preparation of its antiserum[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2007,29(10):938-940. |
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| Authors: | CHEN Ting-mei FENG Jia-fu CAO Ju WEN Yang-an TU Zhi-guang |
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| Institution: | Faculty of Laboratory Medicine, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cystatin C prokaryotic expression system protein purification antiserum |
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