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| 利用流感病毒反向遗传学操作系统表达绿色荧光蛋白(EGFP) | |
| 引用本文： | 徐柯,邢学森,吴杨,喻明霞,龚晓艳,徐军强.利用流感病毒反向遗传学操作系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)[J].湖北预防医学杂志,2013,24(2):4-8. |
| 作者姓名： | 徐柯 邢学森 吴杨 喻明霞 龚晓艳 徐军强 |
| 作者单位： | 1. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京100052 2. 湖北省疾病预防控制中心 3. 武汉大学 |
| 摘 要： | 目的 构建基于RNP复合体的流感病毒反向遗传学操作系统,并利用该系统表达绿色荧光蛋白.方法 将人源pol Ⅰ启动子分别插入真核表达载体pcDNA3和原核质粒pUC18,获得pol Ⅰ/pol Ⅱ双启动子表达载体pCHBW和pol Ⅰ单启动子表达载体pPol IR;来源于禽流感病毒H5N1湖北分离株A/Chicken/Hubei/489/2004的基因被克隆到pCHBW上,获得pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP;将荧光蛋白基因置换NA基因的编码区进而克隆到pPol IR上获得pPol IR-NA (EGFP)；这些质粒共转染293T细胞并观察荧光.结果 所构建的载体均经酶切和测序验证正确.pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP和pPol IR-NA (EGFP)共转染293T细胞后能观察到绿色荧光,Western-blot实验证实被转染的293T细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP).结论 基于RNP复合体的反向遗传操作系统构建成功,并表达绿色荧光蛋白. |
| 关 键 词： | 反向遗传学 荧光蛋白基因 克隆 转染 293T细胞 |
Expression of green fluorescent protein(EGFP) by reverse genetics system for influenza virus based on RNPs transfection |
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