半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs迁移侵袭的影响

目的 观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞（PMN-MDSCs）迁移侵袭的影响。方法 制备含生药量0.63 g·mL^-1的半夏泻心汤含药肠吸收液，以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型，采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法筛选半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的最佳干预浓度及时间，用于后续实验，分为空白组、模型组、FAK抑制剂组及半夏泻心汤组（26%、18%、10%半夏泻心汤含药肠吸收液），采用细胞划痕实验和Transwell实验检测PMN-MDSCs的迁移和侵袭能力，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤微环境中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）细胞因子表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PMN-MDSCs通路相关蛋白局部黏着斑激酶（FAK）、磷酸化（p）-FAK、蛋白酪氨酸激酶（Src）、磷酸化（p）-Src蛋白表达水平。结果 与24 h比较，作用48 h 5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高（P<0.05，P<0.01），与作用48 h比较，培养72 h 50%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h（P<0.01），5%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液略高于48 h（P<0.05，P<0.01），其余浓度抑制率差异无统计学意义，且48 h半数抑制浓度（IC₅₀）为18.09%，说明18%半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间；与空白组比较，模型组PMN-MDSCs迁移距离显著增大（P<0.01），迁移及侵袭数量显著增多（P<0.01）；与模型组比较，FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组PMN-MDSCs的迁移距离均显著减小（P<0.01），迁移及侵袭数量显著减少（P<0.01），以26%含药肠吸收液组最为显著（P<0.01）；与空白组比较，模型组PMN-MDSCs通路相关蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src表达显著升高（P<0.01），VEGF、MMP-9细胞因子表达均显著上升（P<0.01）。与模型组比较，FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组（26%、18%、10%）PMN-MDSCs FAK、p-FAK、Src蛋白表达降低（P<0.01），FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组（18%）p-Src蛋白表达显著降低（P<0.01），VEGF、MMP-9细胞因子表达显著降低（P<0.01）。结论 半夏泻心汤含药肠吸收液通过下调胃癌微环境PMN-MDSCs FAK信号通路蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src的表达，抑制PMN-MDSCs迁移侵袭。

Effect of Banxia Xiexintang-containing Intestinal Absorption Solution on Migration and Invasion of PMN-MDSCs in Gastric Cancer Microenvironment