脾胃湿热证大鼠模型的尿液代谢组学分析

目的 以脾胃湿热证模型大鼠为研究对象，基于尿液代谢组学寻找潜在生物标志物及相关代谢通路，从内源性小分子代谢物层面探究脾胃湿热证候本质。方法 将16只SD大鼠随机分为正常组及模型组，正常组给予普通饲料喂养，模型组在此基础上每日增加200 g·L^-1蜂蜜水自由饮用，猪油与白酒隔日交替灌服，共喂养17 d，第10天起每日相同时间将大鼠置于温度30~34 ℃、相对湿度95%的环境中2 h，共7 d，建立脾胃湿热证大鼠模型，并通过观察一般体征，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆胃动素（MTL）、胃泌素（GT）含量及胃肠组织病理学检查对模型进行评价；利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行尿液代谢组学分析，检测条件为ACQUITY? UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）梯度洗脱（0~3 min，1%~18%B；3~8 min，18%~40%B；8~10 min，40%~100%B），流速0.4 mL·min^-1，电喷雾离子源（ESI），正、负离子模式检测，扫描范围m/z 50~1 000。利用单变量与多变量统计分析筛选组间差异离子，根据精确相对分子质量计算其元素组成，将碎片离子信息与人类代谢组数据库（HMDB）等数据库匹配以鉴定生物标志物。通过京都基因和基因组百科全书（KEGG）数据库获得代谢物的生物信息，采用MetaboAnalyst 5.0软件分析其相关代谢通路。结果 与正常组比较，模型组肛温显著上升（P<0.01），血浆MTL和GT水平均明显下降（P<0.05，P<0.01），胃及结肠组织出现充血、出血及炎性浸润等病理性变化；尿液代谢组学研究发现L-组氨酸、柠檬酸、异柠檬酸等25个差异代谢物可作为脾胃湿热证的生物标志物，其中13个代谢物为内源性物质的Ⅱ相代谢产物（葡萄糖醛酸结合物、硫酸结合物和乙酰基结合物），涉及组氨酸代谢、三羧酸循环、乙醛酸和二羧酸代谢等代谢通路。结论 脾胃湿热证主要引起组氨酸代谢、三羧酸循环、乙醛酸和二羧酸代谢3条代谢通路的紊乱，以及内源性代谢物的活性/失活状态失衡，可能涉及机体免疫应答、物质及能量代谢、炎症反应和肠道菌群等方面，可为脾胃湿热证模型的建立和应用提供依据。

Metabolomic Analysis of Urine in Rat Model with Spleen-stomach Damp-heat Syndrome