骨髓源性侧群细胞的体外增殖及定向诱导分化为肝样细胞的实验研究

目的 (1)过观察骨髓源性侧群细胞(BMSP)在体外培养条件下能否保持侧群细胞的特性,以探讨BMSP在体外扩增的可能性。(2)观察在肝细胞生长因子定向诱导下大鼠BMSP转分化情况,初步探讨肝细胞生长因子在大鼠BMSP转分化为肝样细胞中发挥的作用及机制。方法 (1)从大鼠的股骨和胫腓骨分离骨髓细胞并制备骨髓细胞悬液,通过流式细胞仪分选获取BMSP;用低糖DMEM+10%FBS培养基培养BMSP。采用RT-PCR检测细胞中ABCG-2基因表达水平。(2)在体外向BMSP中加入不同浓度的肝细胞生长因子诱导其向肝样细胞分化,并分别于第3、7、14、21天,通过RT-PCR、免疫印迹等技术检测ALB、AFP细胞表面标志物的表达情况。结果 (1)每只SD大鼠的双侧股骨和胫腓骨所制备的骨髓细胞悬液的细胞总数约2~10×108个,经分选可获得5~10×105个BMSP。(2)BMSP在体外培养6小时后开始贴壁生长,细胞形态以长梭形为主。第7天细胞按1∶2传代培养,传代后细胞于24小时内完全贴壁,细胞传至第10代时,细胞增殖能力仍然很强。(3)诱导分化实验表明:一定浓度的肝细胞生长因子具有明显的促进BMSP转分化为肝样细胞。RT-PCR检测显示:培养第3天的BMSP空白组及因子组的未见AFP、ALB mRNA表达;第7天的因子组见AFP mRNA表达、ALB mRNA不表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第14天的因子组见AFP mRNA表达减弱、ALB mRNA表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第21天因子组见AFP mRNA不表达、ALB mRNA表达减弱,空白组AFP、ALB mRNA均未表达。结论 (1)通过流式细胞仪分选获得BMSP在一定时间内可以在体外扩增并保持干细胞的特性,且传代的BMSP仍具有很强的自我更新和增殖能力。(2)扩增的BMSP在肝细胞生长因子的诱导下可以逐渐向肝样细胞分化。

The Experimental Study of Bone Marrow Side Population Cells Proliferation and Differentiation Into Hepatocytes In Vitro