| 摘 要： | 目的探索骨髓基质细胞用于血友病A基因治疗的可能性.方法采用一包含了B区缺失(△760aa～1?639aa)的人凝血因子ⅧcDNA(FⅧ△BcDNA)的复制缺陷型重组逆转录病毒LNC-FⅧ△B,在低温(32?℃)和离心等改进条件下转化体外分离培养的小鼠和兔骨髓基质细胞.分别采用一期法、ELISA法和半定量PCR方法检测细胞培养上清中人FⅧ的凝血活性(FⅧC)和抗原含量(FⅧAg)以及骨髓基质细胞的基因转化效率.并对转化细胞表达的FⅧ蛋白进行Westernblot分析.结果与标准方法相比,离心和32℃转化使小鼠骨髓基质细胞的基因转染效率提高50%～80%.转化后的小鼠和兔骨髓基质细胞分泌的人FⅧAg分别为每24h(556±80)ng/106细胞和每24h(480±56)?ng/106细胞,FⅧC分别为每24?h2.42?U/106细胞和1.8U/106细胞.Westernblot分析显示,骨髓基质细胞分泌缺失B区的FⅧ蛋白(FⅧ△760～1639aa)与正常人血浆中的野生型FⅧ相似,主要以重-轻链异二聚体形式存在.结论转化后的骨髓基质细胞可以高效分泌人FⅧ,结合离心和低温对方法的改进,可望成为血友病A基因治疗研究的良好靶细胞.
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