| pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 袁晓梅,何勇,雷萍,邢薇,吴砂,代维,朱慧芬,沈关心. pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达[J]. 医学分子生物学杂志, 2007, 4(5): 414-418 |
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| 作者姓名： | 袁晓梅 何勇 雷萍 邢薇 吴砂 代维 朱慧芬 沈关心 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院免疫学教研室,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属协和医院核医学科,武汉市,430022 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30400112)，湖北省十一五科技攻关计划重大项目(No.2006AA301A05)~~ |
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| 摘 要： | 目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。
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| 关 键 词： | 人生长抑素受体2亚型 同源重组 腺病毒增强型绿色荧光蛋白 |
Construction of Recombinant Adenovirus Plasmid-Bearing hSSTr2 and Its Expression in MCF-7 Cells |
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| YUAN Xiaomei,HE Yong,LEI Ping,XIN Wei,WU Sha,DAI Wei,ZHU Huifen,SHEN Guanxin. Construction of Recombinant Adenovirus Plasmid-Bearing hSSTr2 and Its Expression in MCF-7 Cells[J]. Journal of Medical Molecular Biology, 2007, 4(5): 414-418 |
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| Authors: | YUAN Xiaomei HE Yong LEI Ping XIN Wei WU Sha DAI Wei ZHU Huifen SHEN Guanxin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | homologous recombination hSSTr2 adenovirus EGFP |
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