| LentiviralHGF的构建及其体外对β2m-/Thy-1＋ BDLSCs影响的 |
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| 引用本文： | 胡俊杰,孙超,兰玲,李定国.LentiviralHGF的构建及其体外对β2m-/Thy-1＋ BDLSCs影响的[J].胃肠病学和肝病学杂志,2009,18(9):795-799. |
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| 作者姓名： | 胡俊杰 孙超 兰玲 李定国 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属新华医院消化内科,上海,200092 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，上海市科委医学临床研究重点科技攻关项目，教师科研专项基金 |
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| 摘 要： | 目的构建携带大鼠HGF基因的慢病毒载体,并观察慢病毒对体外分选的β2m-/Thy-1＋BDLSCs转染效果及影响。方法采用RT-PCR法从大鼠肝脏中提取HGF基因,并将其克隆到穿梭质粒TG006,与包装质粒一起在293T细胞中重组产生LentiviralHGF慢病毒。通过免疫磁珠法体外分选出β2m-/Thy-1＋BDLSCs;采用荧光显微镜检测LentiviralHGF对BDLSCs的转染效率;采用ELISA法检测大鼠HGF的蛋白分泌水平;采用MTT法和免疫荧光法分别检测病毒对增殖和分化的影响。结果从纤维化大鼠肝脏中成功克隆出HGF基因,并构建LentiviralHGF慢病毒;慢病毒能高效转染BDLSCs。转染慢病毒的BDLSCs向胞外分泌高浓度的HGF。转染LentiviralHGF后,细胞增殖能力提高,ALB表达阳性。结论LentiviralHGF能高效转染BDLSCs,两者结合为肝纤维化的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞 大鼠肝细胞生长因子 慢病毒 基因转导 |
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