肺腺癌穿膜蛋白 125 通过高甲基化介导 NF-κB 信号通路的激活降低对 地西他滨的敏感性 |
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作者姓名: | 郑亚妹 符诒慧 朱轶轲 陈永倖 |
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作者单位: | 海南省人民医院 呼吸与危重症医学科,海南 海口 570100 |
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基金项目: | 海南省卫生健康行业科研资助项目(No.19A200014) |
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摘 要: | 目的:探讨穿膜蛋白125(transmembrane protein125,TMEM125)在肺腺癌组织与A549细胞中的表达,以及影响细胞的增殖和侵袭能力的分子机制。方法:从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库收集肺腺癌数据包,下载临床信息及基因表达谱数据。分析 TMEM125在肺腺癌组织中的表达及其与患者总生存期的相关性。构建 TMEM125过表达 A549细胞株,以CCK-8法、细胞划痕实验检测TMEM125过表达对肿瘤细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TMEM125过表达对A549细胞的细胞周期和凋亡的影响。WB检测TMEM125过表达对下游NF-κB信号通路、凋亡蛋白的影响;免疫共沉淀法(co-immunoprecipitation,Co-IP)检 测 TMEM125 与 NF- κB 抑 制 因 子 结 合 Ras 样 2(NF- κB inhibitor interacting Ras-like 2,NKIRAS2)的相互作用。利用TNFα(10 ng/ml)处理TMEM125过表达A549细胞,CKK-8、流式细胞术及WB检测其对细胞增殖、凋亡以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。去甲基化试剂地西他滨处理A549细胞,qPCR和WB检测TMEM125基因和蛋白的表达。结果:TMEM125 mRNA在肺腺癌组织中表达水平显著低于正常组织(P<0.001),启动子甲基化水平显著高于正常组织(P<0.001),并且低、中表达患者总生存期显著低于高表达患者(P<0.001)。过表达TMEM125抑制了A549细胞的增殖和迁移(P<0.01),增加细胞 G2/M 期,促进细胞凋亡(P<0.01);过表达 TMEM125 与 NKIRAS2 相互作用,显著抑制 NF-κB 的活性(P<0.01);地西他滨处理 A549 细胞可促进 TMEM125 表达并且抑制细胞增殖(P<0.01)。结论:启动子高甲基化水平降低了TMEM125基因表达,导致其抑制NF-κB活性功能和抑制细胞增殖的作用下降,并且降低了细胞对地西他滨的敏感性。
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关 键 词: | 穿膜蛋白;TMEM125;肺腺癌;A549细胞;甲基化;NF-κB |
收稿时间: | 2021-04-24 |
修稿时间: | 2021-08-19 |
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