| 酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎表面抗原中蛋白MHBst167蛋白结合蛋白的研究 |
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| 引用本文： | 李志群,马英骥,成军.酵母双杂交技术筛选肝细胞中与羧基末端截短型乙型肝炎表面抗原中蛋白MHBst167蛋白结合蛋白的研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(2):138-140. |
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| 作者姓名： | 李志群 马英骥 成军 |
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| 作者单位： | 1. 哈尔滨医科大学第一医院感染科,哈尔滨,150001
2. 北京地坛医院传染病研究所 |
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| 摘 要： | 目的应用酵母双杂交技术筛选人肝细胞cDNA文库中与羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白（MHBs^t167）具有相互作用的肝细胞蛋白，以探讨MHBs^t167可能的生物学功能。方法用多聚酶链反应（PCR）法扩增MHBs^t167研基因，应用酵母双杂交系统3，连接人酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒，转染酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合，于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基（SD／-Trp-Leu-His-Ade）上进行双重筛选阳性菌落。挑选阳性克隆，提取此酵母克隆的质粒转化DH5a大肠杆菌并经氨苄青霉素抗性筛选，提取单克隆菌落质粒DNA，酶切鉴定后进行测序，然后进行生物信息学分析。结果成功构建MHBs^t167酵母表达载体pGBKT7-MHBs^t167.筛选出阳性菌落28个，经生物信息学分析，最后从肝细胞cDNA文库中筛选出7个与MHBs^t167特异性结合作用的克隆。其中包括人类核糖基化因子1、胎儿肝全长cDNA克隆、人类醛缩酶B果糖二磷酸（ALDOB）、补体3（C3）、人类血清扩散因子（生长调节素B）、人类BAC（细菌人工染色体）克隆GSI一306C12。结论成功克隆出MHBs^t167基因并在酵母细胞中表达，应用酵母双杂交技术筛选出7个能与MHBs^t167蛋白相互作用的肝细胞结合蛋白基因，根据所克隆到的基因，对以后研究MHBs^t167的生物学功能及乙型肝炎病毒致癌的分子生物学机制奠定了理论基础。
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| 关 键 词： | 乙肝病毒 表面抗原中蛋白 酵母双杂交技术 |
| 文章编号： | 1006-5709（2006）02-0138-03 |
| 收稿时间： | 2006-03-31 |
| 修稿时间： | 2006年3月31日 |
Screening and identification of proteins interacting with MHBst167 by yeast-two hybrid technique |
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| LI Zhiqun,MA Yingji,CHENG Jun.Screening and identification of proteins interacting with MHBst167 by yeast-two hybrid technique[J].Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology,2006,15(2):138-140. |
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| Authors: | LI Zhiqun MA Yingji CHENG Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MHBs^t167 Yeast-two hybrid technique HBV |
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