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| 运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证的相关基因文库 | |
| 引用本文： | 崔丽娟,赵晓山,罗仁,周琳,李玉萍. 运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证的相关基因文库[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2005, 9(19): 94-96 |
| 作者姓名： | 崔丽娟 赵晓山 罗仁 周琳 李玉萍 |
| 作者单位： | 1. 南方医科大学南方医院中医科,广东省,广州市,510515 2. 广州中医药大学第二附属医院广东省中医院内科,广东省,广州市,510515 3. 南方医科大学南方医院内分泌科,广东省,广州市,510515 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助(30271573)，广东省科技计划资助(2003B31712)，国家中医药管理局课题资助(02-03JP43)~~ |
| 摘 要： | 目的:运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为制定2型糖尿病的一、二级康复预防提供理论参考。方法:选择2004-08南方医科大学南方医院内分泌科就诊的汉族2型糖尿病患者1例,符合中医肾虚证诊断标准中关于典型肾阴虚证的诊断,肝肾功能正常,无急慢性感染。以同时期、同性别、年龄相当的自愿者1名作为正常人对照。参照Maxim方法采用硅胶法抽提2例观察对象血白细胞DNA,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液聚合酶链反应筛选出阳性重组质粒,构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库。测定抽提基因组DNA的纯度及含量;基因组DNARsaI酶切产物;消减杂交产物扩增结果;蓝白斑筛选阳性克隆;聚合酶链反应方法筛选重组质粒。结果:用抑制性消减杂交技术筛选出了糖尿病肾阴虚证的差异DNA片段,基因组DNA经过RasI酶切消化后,所得DNA片段主要集中在200～2000bp;消减杂交产物经两次聚合酶链反应扩增后,产物明显增多,内含数条隐约可见的条带,主要集中在0.2～1.5kb;蓝白斑α互补筛选出含有外源插入片段的阳性克隆,结果正向消减杂交产物得到286个克隆,反向消减杂交产物得到262个克隆;随机挑取92个阳性克隆,经聚合酶链反应分析证实86个克隆的质粒内均载有差异性DNA片段,大小为200～1000bp,从而成功构建了糖尿病肾阴虚证特异的DNA消减文库。结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆糖尿病肾阴虚证相关基因奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 糖尿病 非胰岛素依赖型 肾阴虚 杂交 基因文库 |
| 文章编号： | 1671-5926(2005)19-0094-03 |
| 修稿时间： | 2004-12-06 |
Construction of relative genes library of kidney- yin deficiency of type 2 diabetic mellitus by using suppression subtractive hybridization |
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| CUI Li-juan,Zhao Xiao-shan,LUO Ren,Zhou Lin,Li Yu-ping. Construction of relative genes library of kidney- yin deficiency of type 2 diabetic mellitus by using suppression subtractive hybridization[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2005, 9(19): 94-96 | |
| Authors: | CUI Li-juan Zhao Xiao-shan LUO Ren Zhou Lin Li Yu-ping |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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