白眉蝮蛇去整合素rAdinbitor对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞黏附与增殖的影响

背景与目的：蛇毒去整合素是一类从多种蛇毒和水蛭中分离到的含RGD（Arg—Gly—Asp）或KGD（Lys—Gly—Asp）模体的小分子蛋白质，其由于能竞争性地结合细胞表面的整合蛋白受体，阻断肿瘤细胞与细胞外基质的黏附，从而发挥抗肿瘤转移的作用。rAdinbitor是我实验室采用基因克隆方法从大连产白眉蝮蛇（Gloydius blomhoffi brevicaudus）的毒腺中获得的一种含有RGD模体的去整合素。本实验的目的是探讨rAdinbitor对人肝癌细胞系SMMC-7721黏附、增殖的抑制作用，为rAdinbitor抗肿瘤转移的作用机制提供实验依据。方法：以细胞黏附实验观察纤连蛋白（FN）基质对SMMC-7721细胞黏附的影响。分别采用结晶紫染色法和MTT比色法测定重组蛋白rAdinbitor对SMMC-7721向FN黏附的影响，及对已黏附于FN上的SMMC-7721的影响。以MTT比色法检测不同浓度的rAdinbitor对SMMC-7721细胞增殖的影响；HE染色观察200μg／ml Adinbitor诱导SMMC-7721细胞36h凋亡的形态变化；采用流式细胞仪检测rAdinbitor对细胞凋亡的诱导作用。结果：①rAdinbitor对SMMC-7721细胞在FN基质上的黏附有一定的抑制作用，并呈浓度依赖关系，25、50、100、200μg／ml浓度组rAdinbitor的黏附抑制率分别为4．90％、11．73％、22．84％、37．28％，各组差异有显著性（P〈0．05）。②rAdinbitor作用后，已黏附的SMMC-7721细胞变圆、脱落，各浓度组黏附细胞的存活率的平均值分别为98．89％、90．01％、63．37％、35．13％，细胞的增殖受到明显抑制（P〈0．05）。③rAdinbitor对SMMC-7721细胞的增殖具有较强的抑制作用，且随着药物浓度的增加，其抑制作用增强（P〈0．05）。rAdinbitor对SMMC-7721细胞作用48h的IC50值为177．83μg／ml。④200μg／ml rAdinbitor作用SMMC-7721细胞36h呈现早期细胞凋亡的形态改变，凋亡率达20．68％，明显高于未经处理的对照组的2．38％（P〈0．05）。结论：重组白眉蝮蛇去整合素rAdinbitor能够剂量依赖性地抑制SMMC-7721细胞在FN上的黏附，并促使已黏附的SMMC-7721细胞脱落，剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。

Effects of rAdinbitor,a novel disintegrin from Gloydius blomhoffi brevicaudus,on Adhesion and proliferation of human hepatoma cell line SMMC-7721