骨组织工程中细胞因子基因修饰种子细胞来源研究：转染后骨形态发生蛋白—3成纤维细胞株的稳定表达

背景：骨形态发生蛋白(bone morphogenetic pmtein，BMP)是诱导和促进种子细胞向骨细胞方向转化的最重要的细胞因子之一。天然BMP难溶解于培养基，对培养的种子细胞无法有效发挥作用；可溶性重组BMP虽可溶解于培养基，但价格昂贵，而且难于适时、适量的作用于种子细胞。基因治疗为上述问题的解决提供了新的思路。目的：转染外源BMP—3基因入成纤维细胞，筛选获得稳定表达BMP—3的阳性成纤维细胞克隆。设计：单一样本研究。单位：解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所。材料：成纤维细胞(NIH3T3细胞)由第四军医大学口腔医学院司徒镇强教授提供。方法：2000—04／2003—11在全军重点实验室第四军医大学全军骨科研究所实验室完成。采用脂质体转染的方法将外源BMP—3基因转染入NIH3T3细胞，G418筛选后寻找细胞集落，分离、培养，免疫组织化学鉴定，BMP—3染色阳性者为阳性BMP—3表达细胞克隆。主要观察指标：①NIH3T3细胞筛选浓度。②转染阳性细胞克隆的筛选。③筛选的细胞克隆内BMP—3的表达。结果：成功将BMP—3基因转染入NIH3T3细胞，经免疫组化筛选出阳性BMP—3表达成纤维细胞的克隆，建立了BMP—3稳定表达成纤维细胞株。结论：将BMP—3基因真核表达载体转染入成纤维细胞，并经筛选获得了可稳定表达BMP—3的成纤维细胞株，为将来骨组织工程研究中使用细胞因子基因修饰的种子细胞的研究奠定了一定基础。