体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞I、III型前胶原的表达

背景：尽管目前研究将骨髓间充质干细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白高表达作为细胞向某一方向分化的重要标志，但未分化的骨髓间充质干细胞是否表达该类蛋白目前尚无定论。 目的：观察分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达情况。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2007-10/2008-05在广东药学院完成。 材料：ICR小鼠3只，1 d龄ICR乳鼠1只，由广东省医学实验动物中心提供。 方法：利用差速贴壁法体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞，待细胞至70%~80%融合时传代。取1 d龄ICR乳鼠皮肤组织，自行分离传代并冻存，经复苏后获得乳鼠皮肤成纤维细胞。实验组将稳定传代3次的小鼠骨髓间充质干细胞接种到6孔培养板中，按109 L-1密度接种，1 mL/孔；对照组同法接种乳鼠皮肤成纤维细胞，培养72 h。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞的形态及生长情况，RT-PCR法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达。 结果：原代培养的小鼠骨髓间充质干细胞集落形成初期，细胞核较大，胞浆较少，细胞呈三角形、多角形和长梭形等多种形态；传代后细胞生长旺盛，多数呈长梭型，细胞表面有大量微绒毛。培养48 h时，实验组无Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达，对照组表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原；培养72 h时，实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达量显著低于对照组（t=42.692，85.349，P < 0.01）。 结论：传代培养48 h时，骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因尚未启动，至72 h后Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因出现低表达，其并非像成纤维细胞那样在生长过程中持续的表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。