| 凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 邓雯文,刘蜀坤,张遵真.凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达[J].四川大学学报(医学版),2013,44(2):170-174. |
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| 作者姓名： | 邓雯文 刘蜀坤 张遵真 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室,成都,610041
2. 四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室,成都610041;成都中医药大学公共卫生学院卫生毒理学教研室,成都611137 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.81172632)资助 |
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| 摘 要： | 目的 利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达.方法 根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因.并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定；回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+).最后,将A IF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达.结果 成功扩增617 bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合.RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P＜0.05).结论 成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达.
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| 关 键 词： | 凋亡诱导因子 真核表达载体 TA克隆 转染 |
Construction and Expression of the Eukaryotic Expression Vector Containing AIF Gene |
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| DENG Wen-wen,LIU Shu-kun,ZHANG Zun-zhen.Construction and Expression of the Eukaryotic Expression Vector Containing AIF Gene[J].Journal of West China University of Medical Sciences,2013,44(2):170-174. |
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| Authors: | DENG Wen-wen LIU Shu-kun ZHANG Zun-zhen |
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| Institution: | 1.Department of Environmental Health,West China School of Public Health,Sichuan University,Chengdu 610041,China;2.Department of Hygiene Toxicology,Chengdu University of Traditional Chinese Medcine,Chengdu 611137,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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