食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法的建立

目的 建立食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法.探索该方法的细胞采集途径、细胞输注部位和流式检测技术参数.方法 从外周血和腋窝淋巴结分别提取分离出单个核淋巴细胞,经CFSE染色后分别将荧光细胞输注食蟹猴外周血和手掌大鱼际下;经过1、2、3h后从外周血和淋巴结再次提取其中的单个核淋巴细胞,用流式细胞仪检测此样本中荧光细胞数量比例,并优选染色浓度、时长和流式检测技术参数.结果 CFSE最佳染色浓度为1 μmol/L,最佳染色时长为15 min;细胞悬液输注1、2、3h后血管通道组中荧光细胞比例平均值依次为2.37％、0.48％、0.01％,而淋巴管通道中荧光细胞比例显著高于血管通道,平均值依次为12.77％、3.31％、0.07％.结论 使用淋巴管道系统进行淋巴细胞的采集示踪,与传统的从血液系统示踪方法比较,可以显著提高可监测靶细胞的数量,可以直观、量化、动态地了解淋巴细胞在体内的变化状态,此方法可重复性高,是一种稳定的食蟹猴体内免疫标记示踪方法.

Establishment of a fluorescent tracing method for cynomolgus monkey mononuclear lymphocytes in vivo