| 共信号分子CD40/CD40L质粒标准品的构建 |
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| 引用本文： | 王亮,史进方,蔡惠芬,蒋敏,顾国浩.共信号分子CD40/CD40L质粒标准品的构建[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(44). |
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| 作者姓名： | 王亮 史进方 蔡惠芬 蒋敏 顾国浩 |
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| 作者单位： | 王亮(苏州市木渎医院检验科,江苏省苏州市,215101);史进方,蔡惠芬,蒋敏,顾国浩(苏州大学附属第一医院检验科,江苏省临床免疫学实验室,江苏省苏州市,215006) |
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| 摘 要： | 背景:目前,对CD40/D40L的研究主要集中在可溶性和蛋白方面,对其在转录水平上的研究文献不多,可能与其无商品化质粒标准品有关.目的:构建检测CD40/CD40L mRNA表达水平差异的标准品.设计、时间及地点:单一样本实验,于2009-04在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成.材料:取手术切除的子宫肌瘤组织,经患者知情同意.方法:以手术切除的子宫肌瘤组织细胞的总RNA为模板、Random 6mers为引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人CD40/CD40L基因相应的cDNA片断,构建PMD-18-CD40/CD40L重组质粒,鉴定测序后,用荧光定量PCR制作标准曲线.主要观察指标:①RNA质量检测结果.②扩增的目的片段电泳结果.③CD40/CD40L基因测序结果.④标准品的扩增情况.结果:组织提取的总RNA完整性良好,构建的CD40/CD40L质粒经PCR扩增后分别得到136 bp,200 bp的清晰条带,测序结果与目的片段完全一致,且质粒的原始浓度为2.66×10~(13)、2.45×10~(13) copies/mL,倍比稀释至2.0×10~6 copies/mL均能得到良好的标准曲线(R~2=1).结论:实验成功构建了CD40/CD40L基因荧光定量PCR标准质粒.
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| 关 键 词： | T-A克隆 荧光定量PCR |
Construction of co-stimulatory molecular CD40 and CD40 ligand plasmid standards |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CD40/CD40L |
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