双相沉降法重构同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的制备及细胞相容性

背景：同种异体脱钙颗粒骨的重构塑型是目前材料开发的热点研究，但至今仍未找到理想的方法。 目的：采用双相沉降法用Ⅰ型胶原将同种异体脱钙颗粒骨黏合制备成重构同种异体骨，并体外考察其与骨髓间充质干细胞的生物相容性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-09/12在山西省医用组织库完成。 材料：成年健康Wistar大鼠18只。Ⅰ型胶原为美国Sigma公司生产。 方法：取10只大鼠四肢骨，制备同种异体脱钙颗粒骨，用双相沉降法将Ⅰ型胶原和同种异体脱钙颗粒骨制备成凝胶样复合体；取8只大鼠股骨，分离培养骨髓间充质干细胞；取第5代细胞，分别与同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原、同种异体脱钙颗粒骨共培养，另以单纯骨髓间充质干细胞为空白对照组。 主要观察指标：双色流式细胞仪分析细胞表型特征。复合培养第7天倒置显微镜观察细胞的黏附和生长状况。复合培养第5天扫描电镜观察同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的表面结构和细胞生长情况。共培养第4，7天时收集并计数细胞量，用全自动生化分析仪测定碱性磷酸酶含量。 结果：①细胞呈CD45-CD90+CD44+CD71+，符合骨髓间充质干细胞表面抗原特征。②共育7 d时，倒置显微镜观察各组细胞形态无明显差异，生长状态良好。③共育4，7 d时，活细胞数和碱性磷酸酶活性测定结果显示，同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组显著高于同种异体脱钙颗粒组和空白对照组（P < 0.01）。④扫描电镜观察重构同种异体骨由胶原联结成团块状，表面粗糙。同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组共育5 d时，细胞紧密贴附于材料表面，有长突起伸入材料内部；同种异体脱钙颗粒组细胞贴附较少。 结论：双相沉降法制备的重构同种异体骨（同种异体脱钙颗粒骨/I型胶原）具有良好的细胞相容性。