| 体外筛选针对大鼠Toll样受体4 mRNA的小分子干扰RNA序列 |
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| 引用本文： | 卞金俊,朱科明,万小健,邓小明,黄盛东,袁扬,龚德军.体外筛选针对大鼠Toll样受体4 mRNA的小分子干扰RNA序列[J].第二军医大学学报,2008,29(1):0048-0052. |
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| 作者姓名： | 卞金俊 朱科明 万小健 邓小明 黄盛东 袁扬 龚德军 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院麻醉科,上海,200433
2. 第二军医大学长海医院胸心外科,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的:筛选能高效干扰大鼠Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)mRNA的最佳小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列.方法:克隆大鼠TLR4基因全长,将TLR4基因与含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pEGFP-C1重组,构建pEGFP-rTLR4,化学合成法合成3对干扰大鼠TLR4的siRNA后,将3对siRNA、阴性对照siRNA和干扰EGFP的siRNA分别与pEGFP-rTLR4经Lipofectamine2000共转染HEK-293细胞株,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪观察EGFP的荧光强度.结果:与阴性对照组相比,3对针对TLR4的siRNA及针对EGFP的siRNA均明显抑制EGFP的荧光表达(P＜0.05).其中尤以siRNA2(核苷酸序列为5'-GTC TCA GAT ATC TAG ATC T-3',位于TLR4基因序列的1 352～1 370位)的抑制效果最强,干扰效率＞75%.结论:成功筛选出体外可高效干扰大鼠TLR4mRNA的siRNA片段.
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| 关 键 词： | 小分子干扰RNA Toll样受体4 化学合成法 |
| 文章编号： | 0258-879X（2008）01-0048-05 |
| 收稿时间： | 9/5/2007 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2007-10-22 |
Screening for siRNA sequence targeting rat Toll-like receptor 4 mRNA in vitro |
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| BIAN Jin-jun,ZHU Ke-ming,WAN Xiao-jian,DENG Xiao-ming,HUANG Sheng-dong,YUAN Yang,GONG De-jun.Screening for siRNA sequence targeting rat Toll-like receptor 4 mRNA in vitro[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2008,29(1):0048-0052. |
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| Authors: | BIAN Jin-jun ZHU Ke-ming WAN Xiao-jian DENG Xiao-ming HUANG Sheng-dong YUAN Yang GONG De-jun |
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| Institution: | 1.Department of Anesthesiology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 2.Department of Cardiothoracic Surgery, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCR |
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