ELISA定量检测抗dsDNA抗体试剂盒性能验证方法的探讨

目的探讨ELISA定量检测抗双链DNA抗体(下简称抗ds DNA抗体)试剂盒的性能验证方法。方法依据美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)批准的EP15-A2文件方法验证精密度。通过检测过往室间质量评价(external quality assessment,EQA)质评物、与比较试剂进行比较、回收试验等3种方法验证准确度。通过检测空白样本验证检测低限(lower limit of detection,LLD)。通过《CNAS-CL39:医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明》、CLSI C28-A3C文件提供的方法验证临界值。通过改良的Doumas法验证线性范围。结果实测批内、批间变异系数均小于厂家声称的变异系数或按EP15-A2公式计算的验证值。检测EQA质评物阴性符合率为98.4%(63/64),阳性符合率为100%(20/20),总符合率为98.8%(83/84)。与比较试剂的阴性符合率为91.2%(52/57),阳性符合率为87.0%(40/46),总符合率为89.3%(92/103),Kappa值为0.783(P=0.062),两种试剂具有优秀的一致性。平均回收率为99.65%。3种方法验证准确性均通过。实测LLD为0.5 IU/m L,低于厂家声称的1 IU/m L。按CNAS-CL39方法,实测的临界值为18.51IU/m L,与说明书建议的20 IU/m L接近。按C28-A3C方法,临界值验证也通过。线性回归方程为Y=0.978 8X-3.125 4,r~2为0.996 1,截距项-3.125 4与0差异无统计学意义(t=-0.772,P=0.483)。线性范围是1.6~212.5 IU/m L,与厂家声明一致,线性验证通过。结论候选抗ds-DNA抗体试剂盒的精密度、准确度、LLD、临界值、线性范围与厂家的声明一致,能满足临床诊断与治疗的需要。本研究采用的一系列验证方法为ELISA定量检测试剂的性能验证提供了新思路。

Verification for performance of anti-dsDNA antibody quantitative ELISA kit