体外培养人牙囊细胞表达的OPG和RANKL对破骨细胞表型分化的影响

目的:建立人牙囊细胞(Human dental follicle cells,HDFCs)与人外周血单核细胞(Peripheral blood monocytos,PBMCs)共培养体系,研究体外培养人牙囊细胞表达的骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)和核心因子kappB受体激活剂(Receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)对破骨细胞表型分化的影响.方法:取健康成人外周血分离出单核细胞,同时分离12-14岁青少年第三磨牙牙囊进行原代培养,建立两种细胞共同培养系统.实验分七组:A、单核细胞:B、单核细胞+牙囊细胞(接触);C、单核细胞+牙囊细胞(接触)+集落刺激因子-1(Colony stimulating factor-1,CSF-1)+甲状旁腺相关蛋白(Parathyroid hormone-related protein,PTHrP);D、单核细胞+牙囊细胞(不接触);E、单核细胞+RANKL+CSF-1;F、单核细胞+RANKL+CSF-1+牙囊细胞(不接触);G、单核细胞+RANKL+CSF-1+牙囊细胞(不接触)+anti-OPG.把每组细胞接种到预置玻片和牙本质片的24孔板中培养,观察细胞变化.培养第10天,取出玻片,进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,计数每组TRAP染色阳性细胞;第14天取出牙本质片,扫描电镜下观察骨陷窝形成情况.结果:B、F组可见少量破骨样细胞,A、D组无破骨样细胞,E组破骨样细胞分化最显著,C、G组破骨样细胞较E组略少,但无显著性差别(P＞0.05),与其他各组差别显著(P＜0.05).结论:实验结果证实体外培养人牙囊细胞表达的RANKL和OPG分别对破骨细胞表型分化具有正向和负向调节作用.

Effects of OPG and RANKL expressed of human dental follicle cells on osteoclastogenesis