人Cdc25C基因克隆及其原核表达载体的构建与表达 |
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引用本文: | 卓少元,陈承晓,钟卫干,农蔚霞,黄天明,马步国,莫发荣.人Cdc25C基因克隆及其原核表达载体的构建与表达[J].世界华人消化杂志,2014(15):2140-2144. |
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作者姓名: | 卓少元 陈承晓 钟卫干 农蔚霞 黄天明 马步国 莫发荣 |
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作者单位: | 广西中医药大学生物化学与分子生物学教研室;广西医科大学组织学与胚胎学教研室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目,No.81160264;肝脏保护与再生调节北京市重点实验室基金资助项目,No.2011-2~~ |
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摘 要: | 目的:构建人Cdc25C基因的克隆载体和原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:从人肝癌细胞株Bel-7404中提取总R N A,经RT-P C R法扩增人C d c25C c D N A后,将其正确插入克隆载体pMD18-T和表达载体pET-32a(+),并转化至BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中,分别采用0.25 mmol/L IPTG和ArtMediaTM Protein Expression自动诱导表达培养基诱导表达,并对纯化的融合蛋白进行考马斯亮蓝染色和质谱分析鉴定.结果:成功扩增了Cdc25C基因,并获得p M D18-T-C d c25C克隆载体和p E T-32a(+)Cdc25C表达载体;重组质粒在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中均诱导表达出TRx-His-Cdc25C融合蛋白;考马斯亮蓝染色和蛋白质谱分析结果显示基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得肿瘤相关抗原Cdc25C重组蛋白,为后续研究奠定基础.
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关 键 词: | 肿瘤相关抗原 人Cdc25C 原核表达 |
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