| 华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析 |
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| 引用本文： | 何东苟,余新炳,吴忠道,徐劲,吴德,胡旭初,陈守义.华支睾吸虫溶血磷脂酶基因的识别、克隆和序列分析[J].中国病原生物学杂志,2004,17(2):96-99. |
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| 作者姓名： | 何东苟 余新炳 吴忠道 徐劲 吴德 胡旭初 陈守义 |
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| 作者单位： | 中山大学中山医学院病原生物学部,广东广州,510089 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金首批科研团队项目，广东省科技厅社会发展攻关计划(No .2 0 0 2B31 0 0 5)，广州市科技攻关计划 (No .2 0 0 2 2 3 E40 2 2 ) |
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| 摘 要： | 目的 筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫溶血磷脂酶 (csLysoPLAH)基因编码区克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。 方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行随机筛选并测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析。根据PGEX 4T 1和 pcDNA3上的克隆位点及所发现的csLysoPLAHcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX 4T 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX 4T 1 csLysoPLAH、pcDNA3 csLysoPLAH重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。 结果 发现csLysoPLAH基因 ,完整阅读框含 70 8个碱基 ,编码 2 3 5个氨基酸 ,理论分子质量为 2 5 .2 62 8ku ,理论pI为6.0 3。序列分析表明 ,csLysoPLAH编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,csLysoPLAH具有磷脂酶 /羧酸酯酶保守功能域和完整的脂酶保守功能域 ,并含有丝氨酸酯酶特征性的标签肽 (即GXSXG)。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。 结论 发现华支睾吸虫溶血磷脂酶基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。
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| 关 键 词： | 华支睾吸虫 溶血磷脂酶 克隆 序列分析 |
| 文章编号： | 1001-6627(2004)02-0096-04 |
| 修稿时间： | 2003年7月16日 |
INDENTIFICATION AND CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF A NOVEL GENE ENCODING LYSOPHOSPHOLIPASE HOMOLOGUE FROM CLONORCHIASIS SINENSIS |
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| HE Dong-gou,YU Xin-bing,WU Zhong-dao,XU Jin,WU De,HU Xu-chu,CHEN Shou-yi.INDENTIFICATION AND CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF A NOVEL GENE ENCODING LYSOPHOSPHOLIPASE HOMOLOGUE FROM CLONORCHIASIS SINENSIS[J].Journal of Pathogen Biology,2004,17(2):96-99. |
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| Authors: | HE Dong-gou YU Xin-bing WU Zhong-dao XU Jin WU De HU Xu-chu CHEN Shou-yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lysophospholipase homologue Clonorchiasis sinensis clone sequence analysis |
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