As2O3和／或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27^Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）和／或转化生长因子-β1（TGF-β1）作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27^Kip1、cyclin E及内源性TGF—β1 mRNA水平的变化及其意义。用MTT法检测As2O3对NB4细胞的细胞毒性及IC50用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化，流式细胞术检测细胞周期和凋亡，半定量RT—PCR检测P27^Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平。结果表明：As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长，促进NB4细胞的凋亡；As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系，24小时的IC50约为12μmol／L，48小时的IC50约为5μmol／L，72小时的IC50约为3μmol／L。As2O3和／或TGF—β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞，5μmol／L As2O3使NB4细胞阻滞在G2／M期，5ng／ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期，两者联合处理组主要使S期阻滞。As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27^Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调，而cyclin E的mRNA表达下调；联合处理组结果显示TGF—β1可增强As2O3上述作用。结论：As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡，引起细胞周期分布异常；As2O3及外源性TGF—β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27^Kip1高表达以诱导细胞凋亡；TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达，或者通过上调P27^Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性，从而导致NB4细胞周期阻滞。