| 人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 房新建,许文林,张徐,钱晖,陈琛,方莉莉,陈巧云.人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达[J].江苏大学学报(医学版),2009,19(2). |
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| 作者姓名： | 房新建 许文林 张徐 钱晖 陈琛 方莉莉 陈巧云 |
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| 作者单位： | 1. 江苏大学附属人民医院中心实验室,江苏,镇江,212002
2. 江苏大学基础医学和医学技术学院,江苏,镇江,212013 |
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| 基金项目： | 江苏省卫生重大课题，江苏省医学重点人才项目 |
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| 摘 要： | 目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础.
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| 关 键 词： | 多药耐药 侵袭 乳腺癌 |
Construction of human CD44 eukaryotic expression vector and its expression in mammary carcinoma cells |
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| FANG Xin-jian,XU Wen-lin,ZHANG Xu,QIAN Hui,CHEN Chen,FANG Li-li,CHEN Qiao-yun.Construction of human CD44 eukaryotic expression vector and its expression in mammary carcinoma cells[J].Journal of Jiangsu University Medicine Edition,2009,19(2). |
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| Authors: | FANG Xin-jian XU Wen-lin ZHANG Xu QIAN Hui CHEN Chen FANG Li-li CHEN Qiao-yun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CD44 |
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