| 摘 要： | 目的发现并确认膀胱癌致癌基因TOP2A的上游miRNA,并探讨其在膀胱癌中发挥的具体作用及可能机制。方法starBase数据库用于预测膀胱癌中潜在和TOP2A结合的miRNAs,并运用TCGA数据库挖掘对所有预测的miRNAs与靶基因的相关性和生存分析进行排序;根据预测的结合位点情况构建双荧光素酶报告基因实验和干扰实验,以确认候选基因miR-101-3p和TOP2A基因的结合情况;qRT-PCR用于分析两基因在临床组织水平表达相关性;运用细胞转染技术在膀胱癌细胞中分别转染miR-101-3p mimics和inhibitor及各自的阴性对照,随后采用CCK8,细胞划痕愈合实验和Transwell实验测定细胞的增殖及迁移能力变化情况;细胞共转染技术和细胞功能回复实验以明确miR-101-3p/TOP2A信号轴在肿瘤细胞恶性表型中的调控作用。结果 starBase数据库预测获得147个miRNAs;TCGA数据库分析显示,miR-101-3p和TOP2A基因相关系数最高,且与膀胱癌患者不良预后密相关,作为后续实验候选基因;双荧光素酶报告基因实验和干扰实验证实两者在膀胱癌中的结合能力,miR-101-3p可以下调TOP2A基因的表达;临床组织标本中,miR-101-3p和TOP2A基因的表达具有负相关性;此外,体外实验显示,miR-101-3p可以抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力;过表达TOP2A基因,可以恢复膀胱癌细胞的增殖和迁移能力。结论过表达miR-101-3p可以下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞增殖和迁移。
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