小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定 |
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引用本文: | 张明香,符州,田代印,王莉佳,刘恩梅,罗征秀,戴继宏.小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(2). |
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作者姓名: | 张明香 符州 田代印 王莉佳 刘恩梅 罗征秀 戴继宏 |
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作者单位: | 重庆医科大学附属儿章医院呼吸科,重庆,400014 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目 |
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摘 要: | 目的:分别克隆小鼠信号传导和转录活化因子-4(STAT4)、信号传导和转录活化因子-6(STAT6)基因编码序列(CDS序列),构建并鉴定其酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6。方法:PCR扩增STAT4和STAT6基因CDS序列,T-A亚克隆到pMD19-T simple载体中,酶切获取目的基因STAT4和STAT6,克隆入已经过双酶切和CIAP脱磷酸处理的酵母表达载体pGADT7,酶切鉴定并测序;转化pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6到酵母AH109细胞中,Western blot分析STAT4和STAT6的蛋白表达情况,同时检测其毒性和自激活作用。结果:成功扩增了STAT4和STAT6基因CDS序列,并分别成功克隆到pMD19-T simple载体和pGADT7中,测序结果符合要求。酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot结果证实酵母细胞高表达融合蛋白STAT4和STAT6。结论:成功构建了酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6,为进一步研究STAT4和STAT6蛋白与其他蛋白质的相互作用奠定了基础。
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关 键 词: | 哮喘 信号传导及转录活化因子 克隆 酵母表达载体 |
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