| 稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立 |
| |
| 引用本文： | 王鹤,于继云,李力.稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立[J].中国免疫学杂志,2011,27(12):1088-1092. |
| |
| 作者姓名： | 王鹤 于继云 李力 |
| |
| 作者单位： | 1. 广西医科大学附属肿瘤医院,南宁,530021
2. 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 |
| |
| 基金项目： | 2009年广西卫生厅重点课题资助项目(重200970) |
| |
| 摘 要： | 目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系。方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,构建重组真核表达质粒pIRES-neo-HPV58E6E7。利用阳离子脂质体介导法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出稳定转染的阳性克隆。利用Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证HPV58E6E7融合基因在稳定转染的B16细胞株中的表达。结果:经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析,pIRES-neo-HPV58E6E7重组质粒构建正确,转染B16细胞株后,经过Western blot、流式细胞术和免疫荧光等检测显示B16细胞株能够稳定、高效表达HPV58E6E7融合基因,表明B16-HPV58E6E7稳定转染细胞系构建成功。结论:成功构建了pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,建立了可以高效、稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16细胞系。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究HPV58治疗性基因疫苗的功能提供了良好的靶细胞,为其在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。
|
| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒58型 E6E7基因 稳定转染 小鼠黑色素瘤细胞 |
Establishment and identification of B16 cell line stably expressing human papillomavirus (HPV) type 58 E6E7 fusion gene |
| |
| WANG He,YU Ji-Yun,LI Li.Establishment and identification of B16 cell line stably expressing human papillomavirus (HPV) type 58 E6E7 fusion gene[J].Chinese Journal of Immunology,2011,27(12):1088-1092. |
| |
| Authors: | WANG He YU Ji-Yun LI Li |
| |
| Institution: | WANG He,YU Ji-Yun,LI Li.Tumor Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Human papillomavirus type 58 E6E7 gene Stably transfection B16 cell line |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
