| 抗ADAR1锤头状核酶的计算机设计及其可控真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 王海芳,罗晓星,王立锋,扈本荃.抗ADAR1锤头状核酶的计算机设计及其可控真核表达载体的构建[J].第四军医大学学报,2003,24(17):1569-1571. |
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| 作者姓名： | 王海芳 罗晓星 王立锋 扈本荃 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学基础部,药理学教研室,陕西,西安,710033
2. 第四军医大学基础部,生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的：选择针对ADAR1 mRNA的5’非编码区(NCR)和翻译起始区的锤头状核酶(ribozyrme，Rz)切割位点，构建针对ADAR1的Rz可诱导真核表达载体，旨在knock down ADAR1基因，开展ADAR1基因功能的研究．方法：应用计算机辅助设计，根据能量最低化原理，以ADAR1 mRNA的5’NCR和翻译起始区为靶序列，预测其二级结构，选择理想的Rz切割位点，设计并合成锤头状核酶．采用亚克隆法首先将人工合成的Rz DNA序列插入原核载体p1.5的XbaI和KpnI位点获得Rz原核表达质粒pRz-613；再将pRz-613中ADAR1Rz基因连同其两端的自剪切Rz序列一起克隆入可诱导真核表达载体pTRE的SacⅡ和EcoRI位点得到真核表达质粒pRz—ADAR1；通过酶切电泳和测序检查质粒重组后序列情况．结果：选出ADAR1 mRNA的第208位为Rz切点，设计并合成了RzDNA序列.所构建的pRz—ADAR1经酶切电泳鉴定显示，插入Rz序列大小约为180kb，和预期结果相同；经测序证实Rz序列正确．结论：利用计算机辅助设计，成功构建了针对ADAR1锤头状Rz可诱导真核表达载体pRz—ADAR1．
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| 关 键 词： | RNA编辑酶 锤头状核酶 计算机辅助设计 真核表达载体 |
| 文章编号： | 1000-2790(2003)17-1569-03 |
| 修稿时间： | 2003年5月15日 |
Computer design of hammerhead ribozyme targeting ADAR1 mRNA and construction of its inducible eukaryotic expression plasmid |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ADAR1 hammerhead ribozyme computer assisted design eukaryotic expression vector |
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