地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞中RAGE/ROS/凋亡通路的影响

【目的】探讨地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞中RAGE/ROS/凋亡通路的影响。【方法】(1)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胎牛血清组、空白组及地黄饮子含药血清低、中、高剂量组的细胞活力,确定地黄饮子含药血清的最佳浓度和作用时间。(2)以0~20μmol/L Aβ_(1-42)寡聚体处理SH-SY5Y细胞24 h和48 h后,采用MTT法检测细胞活力,Annexin V/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡,确定Aβ_(1-42)作用细胞的最佳浓度及时间,以建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型。(3)采用MTT法检测空白组、模型组、西药对照组及地黄饮子含药血清低、中、高剂量组细胞活力,采用Annexin V/PI双染法观察各组细胞凋亡,采用二氢乙啶(DHE)染色法检测各组活性氧(ROS)含量,观察地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的修复作用。(4)采用Western blot法检测空白组、模型组、地黄饮子含药血清中剂量组RAGE蛋白;进一步将Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞进行RAGE转染后,采用DHE染色法检测各组ROS含量,采用Annexin V/PI双染法检测各组细胞凋亡率,观察地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及RAGE表达的影响。【结果】作用时间为24 h时,地黄饮子含药血清低、中剂量组细胞活力较空白组均显著增强(P0.05或P0.01)。建立AD体外模型的Aβ_(1-42)浓度为5μmol/L,作用时间为24 h。各给药组Aβ_(1-42)诱导细胞活力较模型组显著增强,细胞凋亡率和ROS含量显著下降(P0.05或P0.01),而地黄饮子中剂量组细胞活力最强,细胞凋亡率最低。地黄饮子中剂量组Aβ1-42诱导细胞RAGE蛋白表达较模型组显著降低(P0.05)。地黄饮子中剂量组能降低RAGE转染的Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞的ROS生成和细胞凋亡率(P0.01)。【结论】地黄饮子可能通过抑制ROS产生和细胞凋亡发挥抗氧化作用,进而抑制RAGE蛋白来防治AD。