应用MALDI-TOF MS技术快速鉴定布鲁菌

目的利用MicroflexTMLT型MALDI-TOF质谱仪建立布鲁菌蛋白质量指纹图谱数据库,并评估其在布鲁菌临床分离株鉴定中的应用价值。方法 2013年10月该院微生物实验室分离到1株疑似布鲁菌,经VITEK~2 Compact全自动微生物分析系统及16SrDNA基因测序确认为马耳他布鲁菌,按照厂家推荐方法自建了布鲁菌蛋白质量指纹图谱数据库。对2015年4月及2016年6月该实验室分离到的2株疑似布鲁菌进行革兰染色、柯氏染色及氧化酶、触酶、快速尿素酶等生化反应试验。使用Microflex~(TM)LT型质谱仪收集这2株及外院3株布鲁菌疑似菌株的质量图谱,比对分析图谱时在MALDI Biotyper数据库基础上添加自建数据库,同时使用16SrDNA基因测序法鉴定上述细菌。结果按照自建库推荐操作流程成功获得了基于BRUxh1的自建布鲁菌质量指纹图谱数据库。2015年4月及2016年6月分离到的布鲁菌疑似菌株,涂片染色镜检均为革兰阴性短小球杆菌,氧化酶阳性,触酶阳性,尿素酶阳性(5min内)。这5株疑似菌株的质谱鉴定结果均为布鲁菌(质谱评分分别为2.407、2.475、2.436、2.466、2.397),16SrDNA基因测序确认这5株细菌为布鲁菌。其中来自外院的2株细菌于外院VITEK~2 Compact系统鉴定时均错误地鉴定为吉氏玫瑰单胞菌。结论联合MALDI Biotyper数据库与自建布鲁菌数据库对临床分离株进行质量图谱比对分析,可以实现对布鲁菌属细菌的准确鉴定,该方法快速、灵敏,对布鲁菌病的临床快速诊断具有较高的应用价值。