| 丙型肝炎病毒HCV E1区基因在真核细胞中的表达及表达产物的初步应用 |
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| 引用本文： | 高建恩,陶其敏,马大龙,冯百芳,蒋栋.丙型肝炎病毒HCV E1区基因在真核细胞中的表达及表达产物的初步应用[J].北京大学学报(医学版),2000,32(1):2225. |
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| 作者姓名： | 高建恩 陶其敏 马大龙 冯百芳 蒋栋 |
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| 作者单位： | 1. 北京医科大学人民医院肝病研究所,北京,100044
2. 北京医科大学免疫学系 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,美国中华医学会资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况。方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMSCVE1中切下HCVE1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用WesternBlot方法对表达产物进行鉴定;测定表达产物与20份抗HCV阳性血清标本和10份抗HCV阴性的血清标本的反应性。结果:经酶切过夜后从原核表达载体上切下的基因片段与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3.1连接,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了预期大小的354bp的片段。经磷酸钙转染,产生了具有对G418抗性的细胞克隆,经WesternBlot方法用抗HCVE1区合成肽抗原的单抗检测表达产物,产生了特异的反应;并证实该表达产物与HCV患者的血清有特异反应。经WesternBlot证实在抗HCV阳性血清中有35%(7/20)可与表达产物产生特异的反应;阳性细胞经3个月传代后,仍可检测到HCVE1的表达产物。结论:此项研究所建立的能够表达HCVE1基因细胞系表达产物可与阳性血清发生特异性反应,该细胞系的建立为进一步研究抗HCVE1抗体的临床意义及进行有关HCV核酸免疫的研究创造了条件。
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| 关 键 词： | HCVE1 真核细胞 肝炎病毒 丙型 基因表达 转染 |
| 文章编号： | 1000-1530（2000）01-0022-04 |
| 修稿时间： | 1999-01-29 |
Expression of HCV E1 glycoprotein in mammalian cell line-SP2/0 and the application of the expression product |
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| GAO Jian-En,TAO Qi-Min,MA Da-Long,FENG Bai-fang,JIANG Dong.Expression of HCV E1 glycoprotein in mammalian cell line-SP2/0 and the application of the expression product[J].Journal of Peking University:Health Sciences,2000,32(1):2225. |
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| Authors: | GAO Jian-En TAO Qi-Min MA Da-Long FENG Bai-fang JIANG Dong |
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| Institution: | GAO Jian-En,TAO Qi-Min,FENG
Bai-Fang,JIANG Dong
(Hepatology Institute,Beijing Medical University,Beijing,100044,China)
MA Da-Long
(Department of Immunology,Beijing Medical University) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HCV E1 Eukaryotic cells Hepatitis C viruses Gene expression Transfection |
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