Semaphorin3A通过Notch1对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：探讨轴索导向分子Semaphorin3A（SEMA3A）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响及可能机制。方法：40只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为对照组（正常喂养）、模型组（建立DR模型）、si-SEMA3A组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒）、si-SEMA3A+DAPT组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒和Notch1通路抑制剂DAPT）,每组10只。双标记免疫荧光染色检测视网膜SEMA3A蛋白表达定位;HE染色检测RGC密度;TUNEL法检测RGC凋亡;ELISA检测视网膜炎症因子IL-6和TNF-α表达水平;Western-blot检测视网膜SEMA3A、Notch1及Caspase-3蛋白表达水平。结果：通过SEMA3A和Brn3a（RGC标志物）双标确定SEMA3A在RGC中特异性表达,这说明SEMA3A对视网膜的损伤作用可能是通过RGC实现的。与对照组比较,模型组RGC密度较低（P＜0.05）。与模型组比较,si-SEMA3A组RGC密度较高（P＜0.05）,而si-SEMA3A+DAPT组RGC密度低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。对照组大鼠视网膜组织中未检测到TUNEL阳性RGC。与模型组比较,si-SEMA3A组细胞凋亡率较低（P＜0.05）,而si-SEMA3A+DAPT组细胞凋亡率高于si-SEMA3A组（P＜0.05）。与对照组比较,模型组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较高,而Notch1表达水平较低（P＜0.05）;与模型组比较,si-SEMA3A组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较低,而Notch1表达水平较高（P＜0.05）;而si-SEMA3A+DAPT组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平高于si-SEMA3A组,Notch1表达水平低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。结论：SEMA3A可能通过Notch1信号通路参与糖尿病大鼠RGC凋亡,有望成为糖尿病视网膜病变的治疗靶点。

Effects of Semaphorin3A on apoptosis of retinal ganglion cells in diabetic rats via Notch1