| 针对糖尿病易感基因Vβ13的慢病毒系统的建立及其对T细胞的转导 |
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| 引用本文： | 杜宇,王金冬,张曼,尹凌轩,李文通,李娇,刘志军.针对糖尿病易感基因Vβ13的慢病毒系统的建立及其对T细胞的转导[J].广东医学,2017,38(Z2). |
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| 作者姓名： | 杜宇 王金冬 张曼 尹凌轩 李文通 李娇 刘志军 |
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| 作者单位： | 1. 潍坊医学院病原生物学教研室 山东潍坊 261053;2. 潍坊医学院病理学教研室 山东潍坊 261053;3. 潍坊医学院生物科学与技术学院 山东潍坊 261053 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，山东省自然科学基金资助项目，山东省高等学校科技计划项目，潍坊医学院大学生科技创新基金项目 |
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| 摘 要： | 目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因1型糖尿病易感基因Vβ13的表达,建立一种简便有效基因沉默的系统,并初步研究慢病毒感染T细胞的可能性.方法 以Vβ13 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向Vβ13的shRNA表达质粒,构建携带Vβ13的mCherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞.通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western blot确定最佳沉默Vβ13序列后,将有效的UTG-Vβ13质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,低温超高速离心,获取高滴度慢病毒.应用慢病毒感染大鼠T细胞,光镜观察T细胞被慢病毒感染的情况,流式细胞术检测T细胞的绿色荧光表达情况.结果 成功构建Vβ13-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-Vβ13,RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞Vβ13 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低.构建的慢病毒可以成功感染T细胞.结论 红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率.可作为一种良好的基因导入载体,实现慢病毒介导的RNA干扰在T细胞内的有效表达,并为T细胞过继性转移的相关研究提供技术支持.
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| 关 键 词： | 1型糖尿病 慢病毒 绿色荧光蛋白 红色荧光质粒 Vβ13 |
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