基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制＊

目的 基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制。方法 36只雌性SD大鼠,其中30只构建分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,30只大鼠随机分为模型组、强的松组（0.003 g/100 mL）、清窍胶囊低剂量治疗组（0.36 g/100 mL）、清窍胶囊中剂量治疗组（0.54 g/100 mL）、清窍胶囊高剂量治疗组（0.72 g/100 mL）,每组6只,另6只设为空白对照组。治疗组分别按不同剂量灌胃给药,模型组与空白对照组灌服相同容积的蒸馏水,1次/天,连续14天。给药结束采血,处死,采样待检。苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosin stain,HE）染色观察各组大鼠中耳炎症细胞的变化;酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清白介素-4（Interleukin-4,IL-4）、β-转化生长因子（Transforming growth factor beta,TGF-β）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、γ-干扰素（Interferon γ,IFN-γ）、白介素- 10（Interleukin-10,IL-10）、白介素-17（Interleukin-17,IL-17）水平;流式细胞技术检测脾脏和胸腺Th17/Treg细胞含量;实时荧光定量PCR检测脾脏和胸腺组织叉头盒P3（Forkhead Box P3,FOXP3）、IL-17、维甲酸相关核孤儿受体γt（Retinoic acid-related orphan receptor γt,RORγt）mRNA表达;蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）检测脾脏和胸腺组织RORγT、Foxp3表达。结果 与空白组比较,分泌性中耳炎大鼠黏膜层明显增厚,有大量炎性细胞浸润;且TGF-β、IL-6、IFN-γ、Th17、Treg细胞、IL-17、RORγT水平明显升高,IL-10、IL-4、Foxp3水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,清窍胶囊高剂量组可明显改善中耳炎炎细胞浸润,明显降低模型大鼠TGF-β、IL-6、IFN-γ、IL-17水平,明显升高IL-10、IL-4水平（P<0.05）,并明显降低模型大鼠Treg细胞、RORγT水平,明显升高Foxp3表达（P<0.05）。结论 清窍胶囊可有效地调节TGF-β/Foxp3/RORγt信号通路,进而调节Treg和Th17细胞介导的中耳炎的发生及发展,改善分泌性中耳炎。