沙林对猴全血乙酰胆碱酯酶老化的抑制及重活化作用

目的 采用沙林抑制猴全血乙酰胆碱酯酶（AChE），研究磷酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化作用。方法 （1）37℃恒温水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，后分别加入浓度为0.1, 0.33和1 mmol·L^-1双复磷、氯解磷定（PAM-2-Cl）、碘解磷定（PAM-2-I），用DTNB法分别测定各样品AChE活性，计算重活化率；（2）37℃水浴条件下，采用沙林抑制猴全血AChE的90%活性，每隔10 min, 1, 2, 4和14 h取出100 μl，然后，加入终浓度为1 mmol·L^-1的氯解磷定，用DTNB法测定AChE活性，计算重活化率。以重活化剂重活化率的对数对时间作图，可得磷酰化酶的老化曲线，曲线的斜率即为重活化剂抑制AChE的老化速率常数（K_老化），半老化时间（t_0.5）＝0.693／K_老化，老化率达到99％所需时间（t_0.99）＝4.605／K_老化。结果 在0.1, 0.33和1 mmol·L^-1的浓度下，氯解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为16%, 45%和83%；双复磷对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为18%, 39%和70%；碘解磷定对沙林抑制猴全血AChE的重化活率分别为14%, 41%和72%。在0.1 mmol·L^-1时，双复磷重活化效果最好；氯解磷定在低浓度时，其重活化效果稍差于双复磷，但是，随着其浓度提高，显示出比双复磷较好的重活化效果。采用氯解磷定1 mmol·L^-1为重活化剂时，沙林抑制猴全血AChE磷酰化酶的半老化时间约为12 h。结论 本文实验中使用的3种重活化剂均对沙林抑制的猴全血AChE有较好的重活化作用，其中，氯解磷定对沙林抑制的猴全血AChE有较高的重活化率，实际应用中可能会取得相对较好的急救效果；随着沙林对猴全血AChE抑制时间的延长，磷酰化胆碱酯酶可失去重活化的能力，而成为“老化酶”，很难被重活化，因此, 沙林中毒后应尽早使用氯解磷定等肟类重活化剂。研究发现有一些有机磷中毒用肟类治疗后，有中毒症状缓解后又发生反复的现象，因此使用氯解磷定为重活化剂时，急性中毒症状控制后，建议在磷酰化胆碱酯酶老化之前酌情重复使用重活化剂，直至中毒症状彻底缓解。