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| 计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位 | |
| 引用本文： | 张婷,张学光,瞿秋霞,章良. 计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2011, 18(4): 355-361. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.04.003 |
| 作者姓名： | 张婷 张学光 瞿秋霞 章良 |
| 作者单位： | 1. 苏州大学 医学生物技术研究所,江苏 苏州,215007 2. 苏州大学 医学生物技术研究所,江苏 苏州 215007;江苏省临床免疫学研究所,江苏苏州215007;江苏省干细胞重点实验室,江苏苏州215007 3. 江苏省临床免疫学研究所,江苏苏州,215007 |
| 基金项目： | 重大新药创制科技重大专项资助项目（No. 2009zx09103）,教育部创新团队资助项目（No. IRT0849）,国防预研资助项目（No. B3820110002） |
| 摘 要： | 目的:通过计算机模拟与点突变实验初步探讨本课题组前期研制的抗人CD40激发型单克隆抗体5C11识别的抗原表位。方法:利用InsightⅡ软件分别模拟抗原、抗体结构,构建抗原抗体复合物模型,通过计算推测5C11单抗所识别的抗原表位。构建人野生型CD40(wtCD40)及其第70位苏氨酸突变型(70muCD40)和第114位谷氨酸突变型(114muCD40)的重组真核表达载体pIRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40,脂质体转染法将重组载体导入HEK293细胞,筛选稳定转染细胞株(即HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞)。流式细胞术和Western blotting检测5C11单抗与HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞的结合能力。结果:成功构建pIRES2-EG-FP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40真核表达载体和相应稳定转染细胞株。5C11单抗与HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞结合能力较HEK293/wtCD40细胞明显减弱;Western blotting检测结果表明,5C11单抗仅识别HEK293/wtCD40细胞,不识别HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞。结论:人CD40氨基酸序列的第70位苏氨酸和第114位谷氨酸是其单抗5C11识别的抗原表位,对构建人源化CD40抗体具有潜在的临床意义。 |
| 关 键 词： | CD40 抗原表位 同源模建 点突变 肿瘤生物治疗 |
| 收稿时间： | 2011-05-12 |
| 修稿时间： | 2011-06-10 |
Antigenic epitopes of anti-CD40 monoclonal antibody(5C11) analyzed by computer modeling and site-directed mutagenesis |
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| ZHANG Ting,ZHANG Xue-guang,QU Qiu-xia and ZHANG Liang. Antigenic epitopes of anti-CD40 monoclonal antibody(5C11) analyzed by computer modeling and site-directed mutagenesis[J]. Chinses Journal of Cancer Biotherapy, 2011, 18(4): 355-361. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.04.003 | |
| Authors: | ZHANG Ting ZHANG Xue-guang QU Qiu-xia ZHANG Liang |
| Affiliation: | ZHANG Ting1,ZHANG Xue-guang1,2,3,QU Qiu-xia2,ZHANG Liang1(1.Medical Biotechnology Institute of Soochow University,Suzhou 215007,Jiangsu,China,2.Institute of Clinical Immunology of Jiangsu Province,3.Key Laboratory of Stem Cell of Jiangsu Province,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | CD40 antigenic epitope homology modeling site-directed mutation cancer biotherapy |
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