| 肾上腺髓质素基因腺病毒表达载体的构建及其对骨髓间充质干细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 陈华,苏津自.肾上腺髓质素基因腺病毒表达载体的构建及其对骨髓间充质干细胞增殖的影响[J].中国保健,2008,16(20). |
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| 作者姓名： | 陈华 苏津自 |
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| 摘 要： | 目的:构建表达大鼠AM基因的重组腺病毒载体,探讨其对MSCs增殖的影响.方法:设计AM基因上下游引物,以大鼠肾脏组织总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得AM基因全部序列.片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pshuttle-CMV-AM.经双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,将重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体转染293细胞.制备病毒上清并测定其滴度,并感染大鼠骨髓间充质干细胞,用MTT方法评估其对MSCs增殖的影响.结果:完成构建含有AM基因的重组腺病毒,RT-PCR及Western blot检测证实AM在MSCs中表达,并能够促进其增殖(缺氧组与缺氧 AM组相比,P＜0.01).结论:构建重组腺病毒载体,并在MSCs表达AM蛋白.
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| 关 键 词： | 腺病毒科 载体 肾上腺髓质素 骨髓间充质干细胞 |
Construction of recombinant adenovirus vector containing rat adrenomedullin gene and its effects on proliferation of mesenchymal stem cells |
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