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| 应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的下调基因 | |
| 引用本文： | 纪冬,成军,郭江,刘妍,陈国凤,王琳.应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的下调基因[J].中华老年多器官疾病杂志,2005,4(4):282-286. |
| 作者姓名： | 纪冬 成军 郭江 刘妍 陈国凤 王琳 |
| 作者单位： | 1. 100039,北京市,解放军第302医院感染七科 2. 北京市地坛医院 3. 100039,北京市,解放军第302医院病毒性肝炎研究中心 |
| 摘 要： | 目的筛选与克隆乙型肝炎表面抗原大蛋白(LHBs)的下调基因,以阐明HBV感染相关性疾病的分子生物学机制.方法应用常规分子生物学方法,克隆LHBs基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-LHBs.将pcDNA3.1(-)-LHBs与pCAT3-promoter共转染肝癌细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性.分别以pcDNA3.1(-)-LHBs以及pcDNA3.1(-)转染HepG2细胞,提取mRNA并逆转录为cDNA,来源于pcDNA3.1(-)-LHBs转染细胞的cDNA为驱动(driver),来源于pcDNA3.1(-)的cDNA为测试(tester),进行抑制性消减杂交分析,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆进行测序及同源性分析.结果 ①成功构建pcDNA3.1(-)-LHBs真核表达载体;②pcDNA3.1(-)-LHBs与pCAT3-promoter共转染HepG2细胞的CAT表达活性较对照组的活性明显下降(P＜0.01),抑制率达93.9%;③成功构建人LHBs下调基因的cDNA消减文库.通过生物信息学分析获得14种编码基因.结论 LHBs是HBV基因组编码的一种反式调节因子,可以下调SV40早期启动子的活性.筛选到的LHBs下调的cDNA全长序列,包括与抗氧化防御、细胞生长调节、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,以此可以推测LHBs存在的调控机制以及HBV的致病(癌)机制. |
| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒 表面抗原 反式调节 |
| 收稿时间： | 06 6 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005年6月6日 |
Screening of the target genes down-regulated by HBV large surface protein with suppression subtractive hybridization technique |
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| JI Dong,CHENG Jun,GUO fiang,et al.Screening of the target genes down-regulated by HBV large surface protein with suppression subtractive hybridization technique[J].Chinrse journal of Multiple Organ Diseases in the Elderly,2005,4(4):282-286. | |
| Authors: | JI Dong CHENG Jun GUO fiang |
| Institution: | The 7 th Department of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PIA, Beijing 100039, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | hepatitis B virus surface antigen trans-regulation |
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