| 穿透肽TAT融合表达载体的优化及其靶向应用的初步研究 |
| |
| 引用本文： | 吴向玲,刘芸,邓鹏,姜勇. 穿透肽TAT融合表达载体的优化及其靶向应用的初步研究[J]. 解放军医学杂志, 2010, 35(6) |
| |
| 作者姓名： | 吴向玲 刘芸 邓鹏 姜勇 |
| |
| 作者单位： | 南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广州,510515 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部长江学者和创新团队发展计划，国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金，广东省自然科学基金，广州市科技计划项目 |
| |
| 摘 要： | 目的设计并构建分别位于融合蛋白氨基端和羧基端的穿透肽TAT表达载体,比较两种融合蛋白的内化差异,并利用TAT将凋亡素VP3转导入细胞内,检测其促凋亡活性。方法荧光显微镜观察His-TAT-EGFP和His-EGFP-TAT融合蛋白内化效率的差异,并利用Western blotting检测内化入细胞的蛋白量。将VP3序列插入到内化效率高的穿透肽载体pET14b-EGFP-TAT中并诱导表达蛋白,观察该蛋白在不同细胞系(HeLa、HEK293、3T3、PC-3)的内化;利用DAPI染色观察该融合蛋白诱导HeLa细胞凋亡后核小体的形成,MTT法检测细胞存活率。结果在蛋白浓度梯度实验中,荧光显微镜观察和Western blotting检测均显示His-EGFP-TAT融合蛋白的内化效率明显高于His-TAT-EGFP融合蛋白。在不同种类细胞中均可观察到His-VP3-EGFP-TAT内化的强荧光颗粒;该蛋白和对照蛋白(His-EGFP-TAT)孵育HeLa细胞48h后,His-VP3-EGFP-TAT孵育细胞中可观察到核小体形成,MTT法检测该组细胞的存活率在500、1000、2000nmol/L蛋白作用下分别为87.23%±2.09%、53.01%±1.79%和42.52%±1.90%,与His-EGFP-TAT孵育细胞存活率(分别为97.21%±1.41%、95.72%±1.26%和94.35%±1.67%)比较差异有统计学意义(P0.01)。结论 TAT位于融合蛋白羧基端的蛋白内化活性高于位于氨基端的蛋白,His-VP3-EGFP-TAT融合蛋白可以高效内化进入不同的细胞系,并能有效诱导细胞凋亡。
|
| 关 键 词： | 穿透肽 细胞凋亡 基因产物,tat |
Optimization design of penetrating peptide TAT fusion expression Vector and preliminary study on its targeting application |
| |
| WU Xiang-ling,LIU Yun,DENG Peng,JIANG Yong. Optimization design of penetrating peptide TAT fusion expression Vector and preliminary study on its targeting application[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2010, 35(6) |
| |
| Authors: | WU Xiang-ling LIU Yun DENG Peng JIANG Yong |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
