磷酸胆碱聚合物载TGF—β1反义寡核苷酸转染血管外膜成纤维细胞对TGF—β1的影响

目的观察新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否有效地转染针对转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的反义寡核苷酸（AS—ODN）进入到血管外膜成纤维细胞中及转染后对血管外膜成纤维细胞内TGF-β1表达的影响，为MPC30-DEA70，聚合物作为药物基因治疗载体在心血管疾病中的运用奠定基础。方法组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞；应用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察MPC30-DEA70／TGF-β1AS-ODN（FAM标记）在细胞内的分布和定位；流式细胞仪（FCM）检测二者的细胞转染效率、荧光强度；免疫印迹实验（Western blot）检测TGF-β1细胞内表达。结果①原代培养的细胞呈纺锤形，多角形或者不规则形，细胞核较大，数量1～2个不等，轮廓清楚，核仁大而明显，呈椭圆形；②激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围；③流式结果显示转染效率及荧光强度随N／P比增加而明显增大；④Western blot结果显示随着N／P比值的增大，TGF-β1的蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论MPC30-DEA70，能够携带TGF-β1-AS—ODN进入离体培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞，并能下调TGF—β1蛋白的表达。