基因免疫制备抗人BLyS单克隆抗体及单抗特性分析

目的:基因免疫制备抗人BLyS单克隆抗体并分析其免疫学特性。方法:将人BLyS基因克隆到真核表达载体pcDNA3,构建重组质粒pcDNA3/hBLyS,用其免疫BALB/c鼠,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用ELISA法筛选阳性克隆,用免疫印迹和流式细胞技术进一步鉴定抗体的特异性,用双向免疫扩散鉴定单克隆抗体的类别。结果:重组质粒双酶切结果和DNA序列测定结果表明,pcDNA3/hBLyS重组质粒含有目的基因;ELISA、免疫印迹、流式细胞仪和双向免疫扩散等实验结果表明,9c10杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合IFN-γ激活的人T淋巴细胞膜表面BLyS蛋白的膜外区,属于IgG1亚类。结论:获得了能够特异性结合人T淋巴细胞上BLyS蛋白膜外区的单克隆抗体,为进一步研究人BLyS与自身免疫性疾病的关系提供了条件。